针刺预处理对脑梗死大鼠细胞凋亡及炎性因子的影响Effect of Acupuncture Preconditioning on Apotosis and Inflammatory Factors of ischemic cerebral
秦彦强,孙忠人,张亚娟,魏庆双,姜凡,刘尚策
摘要(Abstract):
目的探讨针刺预处理对脑梗死大鼠细胞凋亡及炎性因子的影响。方法采用改良Zea Longa方法制备大脑中动脉闭塞脑梗死(MCAO)模型,将90只大鼠随机分为正常组、假手术组、脑梗死组、缺血预处理组、针刺预处理组5组各18只,每组均分为1、3、7 d 3个亚组各6只。正常组不予特殊处理;假手术组只切开皮肤,暴露颈总动脉、颈内外动脉,不插入线栓;脑梗死组采用改良Zea Longa方法制备MCAO模型;缺血预处理组于造模前24 h于颈外动脉插入自制线栓,栓塞大脑中动脉后,间断缺血30 min;针刺预处理组于造模前针刺大鼠双侧风池穴,连续7 d。各组分别于处死前4 h进行神经功能评分,TUNEL法检测细胞凋亡,Realtime PCR和ELISA法分析脑组织TNF-α、IL-1β。结果脑梗死组、缺血预处理组、针刺预处理组大鼠神经功能评分、TUNEL法阳性细胞计数、TNF-α、IL-1βm RNA表达水平和含量均高于正常组和假手术组(均P<0.05)。缺血预处理组、针刺预处理组1 d时大鼠神经功能评分与脑梗死组差别不大(P>0.05),而两组在3、7 d时,大鼠神经功能评分均低于脑梗死组(P<0.05或P<0.01)。缺血预处理组与针刺预处理组大鼠神经功能评分差别不大(P>0.05)。正常组和假手术组可见少量TUNEL阳性细胞,梗死组、缺血预处理组和针刺预处理1 d时TUNEL阳性细胞数均较多,3 d时开始下降。而缺血预处理组、针刺预处理组3 d时阳性细胞数明显减少,少于梗死组。脑梗死组、缺血预处理组、针刺预处理组1、3、7 d时,TUNEL法阳性细胞计数均高于正常组和假手术组(均P<0.05)。缺血预处理组、针刺预处理组1 d时TUNEL法阳性细胞计数与脑梗死组差别不大(P>0.05),而在两组3、7 d时,TUNEL法阳性细胞计数均低于脑梗死组(P<0.01或P<0.01)。缺血预处理组与针刺预处理组TUNEL法阳性细胞计数1、3、7 d时差别不大(均P>0.05)。脑梗死组、缺血预处理组、针刺预处理组1、3、7 d时的TNF-α、IL-1βm RNA水平和含量均高于正常组和假手术组(均P<0.05)。缺血预处理组、针刺预处理组1、3、7 d时,TNF-α、IL-1βm RNA表达水平和含量均低于脑梗死组(P<0.05或P<0.01)。缺血预处理组与针刺预处理组1、3、7 d时,TNF-α、IL-1βm RNA表达水平和含量则差别不大(均P>0.05)。结论脑梗死后,梗死灶边缘神经细胞凋亡,TNF-αm RNA、IL-1βm RNA表达上升,炎性因子TNF-α、IL-1β增多。针刺风池穴预处理,可以抑制神经细胞调亡,减少炎性因子TNF-αm RNA、IL-1βm RNA表达,降低TNF-α、IL-1β含量,减轻脑梗死炎性反应,改善脑梗死大鼠模型神经功能。
关键词(KeyWords): 脑梗死;针刺;预处理;细胞凋亡;炎性因子
基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(30873298);; 黑龙江中医药大学“优秀创新人才支持计划”科研项目(领军人才类)(2012RCL01)
作者(Author): 秦彦强,孙忠人,张亚娟,魏庆双,姜凡,刘尚策
参考文献(References):
- [1]王北松.缺血性脑血管病研究近况与中医治疗概略[J].中医药信息,2001,18(3):2-5.
- [2]王强,朱广旗,胡蓉.针刺风池、“供血”穴治疗椎-基底动脉供血不足临床疗效与机制探讨[J].中国针灸,2009,29(11):861-864.
- [3]Zea Longa E,Weinstein PR,Carison S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.
- [4]Jong Youl Kim,Masahito Kawabori,Midori A.Yenari.Innate inflammatory responses in stroke:mecha nisms and potential therapeutic targets[J].Current medicinal chemistry,2014,21(18):2076-2097.
- [5]Rong Jin,Lin Liu.Role of inflammation and its mediators in acute ischemic stroke[J].Journal of cardiovascular translational research,2013,6(5):10.
- [6]Bolanle M.The immune response to acute focal cerebral ischemia and associated post-stroke immunodepression:a focused review[J].Aging and Disease,2014,5(5):307-326.
- [7]Lingfeng Wu,Kunnan Zhang.Inflammatory response and neuronal necrosis in rats with cerebral ischemia[J].Neural Regeneration Research,2014,9(19):1753-1762.
- [8]Savita Khanna,Zachary Briggs,Cameron Rink.Inducible glutamate oxaloacetate transaminase as a therapeutic target against ischemic stroke[J].Antioxidants&Redox Signaling,2015,22(2):177.
- [9]Rachna S,Pandya,Lijuan Mao.Central nervous system agents for ischemic stroke:neuroprotection mechanisms[J].Central Nervous System Agents in Medicinal Chemistry,2011,11(2):89.
- [10]Syamantak Majumder,M.Ilayaraja.Chick embryo partial ischemia model:a new approach to study ischemia Ex Vivo[J].PLo S ONE,2010,5(5):528.
- [11]kitagawa K,Matsumoto M,Tagaya M,et al.Ischamic tolerance phenomenon found in the brain[J].Brain Res,1990,528(2):21-22.
- [12]孙忠人,唐伟,王威,等.针刺预处理诱导全脑缺血大鼠海马区即刻早期基因c-fos m RNA及其蛋白的表达[J].中国临床康复,2006,10(19):125-127.
- [13]陈丽平.百会、水沟穴不同时程电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的影响[D].浙江:浙江中医药大学,2013:3.
- [14]袁晓军,郝喜书,赖仲平,等.针刺风池穴对脑血流的影响[J].中医杂志,1996,37(5):28.
- [15]Raghupathi R,Conti AC,Graham DI,et al.Mild traumatic brain injury induces apoptotic cell death in the cortex that is preceded by decreases in cellular Bcl-2 immunoreactivity[J].Neuroscience,2002,110(4):605-616.
- [16]刘旭.脑梗死患者血清TNF-α、IL-6和IL-8水平变化的临床意义分析[J].中国现代药物应用,2015,9(2):42.